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L'Opera di Santa Maria del Fiore promuove, organizza o sostiene iniziative di carattere culturale, come concerti ed altri eventi musicali, conferenze, convegni di studi, mostre, manifestazioni popolari o aperture straordinarie dei monumenti.

Alcune iniziative hanno assunto negli anni una periodicità che le colloca nel calendario dell'offerta culturale fiorentina. Da segnalare, tra queste, la rassegna di musica sacra O flos colende, istituita nel 1997 per celebrare i 600 anni della fondazione dell’Opera di Santa Maria del Fiore che - frequentata da un vasto pubblico in Cattedrale - si distingue per l’eccellenza degli interpreti e l'originale programmazione, comprendente il repertorio musicale conservato nell’Archivio dell’Opera e Note al Museo, vera e propria stagione concertistica, nata per l’inaugurazione del nuovo Museo dell’Opera del Duomo e che da allora si è imposta all’attenzione degli appassionati di musica per l’elevata qualità artistica e la varietà delle proposte.

Agli eventi ricorrenti si sono accompagnati altri progetti culturali, che variano dalle manifestazioni di rilievo internazionale ad iniziative rivolte al grande pubblico, nel solco di una ravvivata tradizione, e a quelle di inclinazione più accademica e scientifica, finalizzate ad un avanzamento del sapere. Un'ampia ed articolata proposta culturale, pensata per le diverse aspettative di cittadini e visitatori.